Regularni strażnicy

Można ich podzielić na dwie grupy ze względu na stopień. Większość z nich to niższego stopnia milicjanci. Nie posiadają żadnego pancerza i noszą najsłabszą broń dostępną w grze. Rzadko możemy spotkać ich w osamotnieniu, najczęściej przemieszczają się czteroosobowymi patrolami w obecności silniejszych kolegów. Gdy nie idzie im najlepiej podczas walki, mogą zdezerterować by ocalić swe życie. Charakterystycznym elementem ich ubioru jest beret na głowie. Druga grupa, wyższa stopniem od milicjantów, to dowódcy. Noszą na sobie o wiele więcej pancerza, i walczą lepszą bronią. Do ich zabicia potrzebna jest większa liczba kontrataków, niż w przypadku milicjantów.


Zwinni

Noszą wyłącznie lekkie zbroje i broń krótką. Zwinni strażnicy są szybsi od reszty wrogów Ezio, i mogą pochwycić nas nawet w biegu. Uciekając po dachach nie możesz już czuć się całkiem bezpieczny, gdyż podążą za Tobą nawet tam. Gdy przegrywają, a nie należą do najsilniejszej grupy żołnierzy, mogą zacząć uciekać w celu powiadomienia reszty straży. Starcia szybko ich męczą, co sprawia, że są łatwi do pokonania. Najskuteczniejszą metodą obrony jest kontratak i rozbrojenie.


Szukacze

O ile stogi siana były bezpiecznym schronieniem w Assassin's Creed, tak w Assassin's Creed II to się zmieniło. Wszystko za sprawą szperaczy, którzy będą utrudniać nam życie także w AC:Brtherhood. Posiadają oni lepsze zbroje od wyższego stopnia regularnych i preferują walkę bronią długą, taką jak halabardy bądź włócznie. Ich zbroja jest ciężka, co sprawia, że nie podążą za Ezio po dachach czy belkach. Najlepszym sposobem na pozbycie się szperacza jest rozbrojenie i zabicie go własną bronią. Skuteczne jest również złapanie delikwenta i poderżnięcie gardła mieczem. Szperacze przekuwają swoimi włóczniami stogi siana, jak i podchodzą do ławek w poszukiwaniach Ezio.


Brutale

Ten rodzaj straży wyposażony jest w ciężką zbroję, która pokrywa niemal całą powierzchnię ich ciała, oraz dwuręczny miecz bądź topór. Brutala można kontrować jedynie bronią ciężką lub długą. Broń konwencjonalna i krótka może zostać wytrącona z ręki Ezio. Najlepszym sposobem na pozbycie się tego typu strażnika jest, jak w przypadku szukaczy, rozbrojenie i wykończenie go własną bronią.



Kusznicy

Są to strażnicy rozstawieni na dachach, wyposażeni w lekką zbroję. Ich główną i najgroźniejszą bronią jest kusza. Pełnią taką samą rolę jak łucznicy występujący w Assassin's Creed i Assassin's Creed II. W przeciwieństwie do łuczników z poprzednich części, którzy przy bliskich starciach chowali łuki i łapali za miecz, potrafią strzelić do Ezio nawet z bliskiej odległości. Bardzo łatwo ich ominąć bez walki, wystarczy poczekać za np. kominem i gdy odwrócą się do Ezio plecami, bezpiecznie przebiec dalej.



Strzelcy

Straż wyposażona w broń palną, (Po raz pierwszy, w całej serii, broń palna jest do dyspozycji sztucznej inteligencji) nosząca więcej pancerza, w tym charakterystycznego tylko dla tego typu hełmu zasłaniającego całą twarz. Jak wyżej wymieniani kusznicy, zastępują łuczników z poprzednich części.



Gwardia Papieska

Osobista straż Papieża. Wyglądem przypominają brutali, są mocno opancerzeni i walczą lepszym orężem od reszty strażników. Do ich dyspozycji została oddana również broń palna. Łączą w sobie siłę brutali, szybkość i łatwość biegu zwinnych strażników i umiejętności szukaczy. Na ten typ straży nie skutkuje rozbrojenie, skuteczne są jedynie kontrataki za pomocą ukrytego ostrza lub broni długiej. Zdecydowanie najsilniejsi przeciwnicy.




Jeźdźcy

W Assassin’s Creed: Brotherhood dostaliśmy możliwość wjechania rumakiem do miasta. W błędzie jest ten kto myśli, że tylko główny bohater dostąpił tego zaszczytu. Jeźdźcy to strażnicy dosiadający koni. Posługują się mieczem lub kuszą. Najlepszym sposobem na pozbycie się jeźdźcy jest śmierć z powietrza. Łatwo również pozbyć się pościgu składającego się z tego typu przeciwników, wystarczy uciec w miejsce niedostępne dla konia dosiadanego przez strażnika.



Wyznawcy Romulusa

Są niegroźnymi przeciwnikami w pojedynkę lecz w grupie potrafią być zabójczo skuteczni. Wyposażeni w skórzane pancerze, preferują walkę przy pomocy broni krótkiej, co nie znaczy jednak, że stronią od innego rodzaju oręża. Łatwo poddają się kontratakom i rozbrojeniom. Atutem wyznawców jest umiejętność wspinaczki i free runingu, dzięki czemu mogą podążyć za Ezio niemal wszędzie. Mogą również strącić głównego bohatera, za pomocą kamieni lub noży do rzucania, podczas wspinaczki.